პროდუქტები
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR გამოვლენის ნაკრები 2019-nCoV-სთვის
მოსალოდნელი გამოყენება
ეს ნაკრები გამოიყენება ახალი კორონავირუსის (2019-nCoV) ხარისხობრივი გამოვლენისთვის ყელის ნაცხის, ნაზოფარინგეალური ნაცხის, ბრონქოალვეოლური ამორეცხვის სითხის, ნახველის გამოყენებით. ამ პროდუქტის გამოვლენის შედეგი მხოლოდ კლინიკური მითითებისთვისაა და ის არ უნდა იქნას გამოყენებული როგორც ერთადერთი. კლინიკური დიაგნოზისა და მკურნალობის მტკიცებულება. მდგომარეობის ყოვლისმომცველი ანალიზი რეკომენდებულია პაციენტის კლინიკურ გამოვლინებებთან და სხვა ლაბორატორიულ ტესტებთან ერთად.
შემოწმების პრინციპი
ნაკრები დაფუძნებულია ერთსაფეხურიანი RT-PCR ტექნოლოგიაზე.სინამდვილეში, 2019 წლის ახალი კორონავირუსის (2019-nCoV) ORF1ab და N გენები შეირჩა გაძლიერების სამიზნე რეგიონებად.სპეციფიური პრაიმერები და ფლუორესცენტური ზონდები (N გენის ზონდები იარლიყებულია FAM-ით და ORF1ab ზონდები ეტიკეტირებულია HEX-ით) შექმნილია ნიმუშებში 2019 წლის ახალი ტიპის კორონავირუსის რნმ-ის გამოსავლენად.ნაკრები ასევე შეიცავს შიდა კონტროლის გამოვლენის ენდოგენურ სისტემას (შიდა კონტროლის გენის ზონდი ეტიკეტირებული CY5) ნიმუშის შეგროვების პროცესის მონიტორინგისთვის, რნმ და PCR გაძლიერება, რითაც ამცირებს ცრუ უარყოფით შედეგებს.
ძირითადი კომპონენტები
| კომპონენტები | მოცულობა(48T/Kit) |
| RT-PCR რეაქციის ხსნარი | 96 მკლ |
| nCOV პრაიმერი TaqMan ზონდი (ORF1ab, N გენი, RnaseP გენი) | 864 მკლ |
| უარყოფითი კონტროლი | 1500 მკლ |
| nCOV დადებითი კონტროლი (l ORF1ab N გენი) | 1500 მკლ |
საკუთარი რეაგენტები: რნმ-ის ექსტრაქციის ან გამწმენდი რეაგენტები.უარყოფითი/დადებითი კონტროლი: დადებითი კონტროლი არის რნმ, რომელიც შეიცავს სამიზნე ფრაგმენტს, ხოლო უარყოფითი კონტროლი არის ნუკლეინის მჟავისგან თავისუფალი წყალი.გამოყენებისას ისინი უნდა მონაწილეობდნენ ექსტრაქციაში და უნდა ჩაითვალონ ინფექციურად.მათი დამუშავება და განადგურება უნდა მოხდეს შესაბამისი წესების შესაბამისად.
შიდა საცნობარო გენი არის ადამიანის RnaseP გენი.
შენახვის პირობები და ვარგისიანობის ვადა
-20±5℃, მოერიდეთ განმეორებით გაყინვას და დნობას 5-ზე მეტჯერ, მოქმედებს 6 თვე.
მოქმედი ინსტრუმენტი
FAM / HEX / CY5 და სხვა მრავალარხიანი ფლუორესცენტური PCR ინსტრუმენტებით.
ნიმუშის მოთხოვნები
1. გამოსაყენებელი ნიმუშის ტიპები: ყელის ნაცხი, ნაზოფარინგეალური ნაცხი, ბრონქოალვეოლური ამორეცხვის სითხე, ნახველი.
2. ნიმუშის შეგროვება (ასპტიკური ტექნიკა)
ფარინგეალური ტამპონი: მოიწმინდეთ ნუშისებრი ჯირკვლები და ფარინგეალური უკანა კედელი ორი ნაცხით ერთდროულად, შემდეგ ჩაყარეთ ნაცხის თავი სინჯის აღების ხსნარის შემცველ სინჯარაში.
ნახველი: მას შემდეგ, რაც პაციენტს აქვს ღრმა ხველა, შეაგროვეთ ამოღებული ნახველი ხრახნიანი თავსახურის სინჯარაში, რომელიც შეიცავს სინჯის აღების ხსნარს;ბრონქოალვეოლური ამორეცხვის სითხე: ნიმუშების აღება სამედიცინო პროფესიონალების მიერ.3.ნიმუშების შენახვა და ტრანსპორტირება
ვირუსის იზოლაციისა და რნმ-ს ტესტირების ნიმუშები უნდა შემოწმდეს რაც შეიძლება მალე.ნიმუშები, რომელთა აღმოჩენა შესაძლებელია 24 საათის განმავლობაში, შეიძლება ინახებოდეს 4℃ ტემპერატურაზე;ისეთები, რომელთა აღმოჩენა შეუძლებელია 24-ში
საათები უნდა ინახებოდეს -70℃ ან ქვემოთ (თუ არ არის შენახვის პირობები -70℃, ისინი უნდა იყოს
დროებით ინახება -20℃ მაცივარში).ნიმუშები ტრანსპორტირებისას თავიდან უნდა აიცილონ განმეორებითი გაყინვა და დათბობა.ნიმუშები უნდა გაიგზავნოს ლაბორატორიაში შეგროვების შემდეგ რაც შეიძლება მალე.თუ საჭიროა ნიმუშების ტრანსპორტირება დიდ მანძილზე, რეკომენდებულია მშრალი ყინულის შენახვა.
ტესტის მეთოდები
1 ნიმუშის დამუშავება და რნმ-ის მოპოვება (ნიმუშის დამუშავების არეალი)
რეკომენდირებულია 200 მკლ თხევადი ნიმუშის აღება რნმ-ის ექსტრაქციისთვის.მოპოვების შესაბამისი საფეხურებისთვის, იხილეთ კომერციული რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრების ინსტრუქციები.უარყოფითიც და უარყოფითიც
ამ ნაკრების კონტროლი ჩართული იყო მოპოვებაში.
2 PCR რეაგენტის მომზადება (რეაგენტის მომზადების ადგილი)
2.1 ამოიღეთ კომპლექტიდან ყველა კომპონენტი და გაალღვეთ და აურიეთ ოთახის ტემპერატურაზე.გამოყენებამდე რამდენიმე წამის განმავლობაში ცენტრიფუგა 8000 ბრ/წთ სიჩქარით;გამოთვალეთ რეაგენტების საჭირო რაოდენობა და რეაქციის სისტემა მზადდება, როგორც ნაჩვენებია შემდეგ ცხრილში:
| კომპონენტები | N პორცია (25µl სისტემა) |
| nCOV პრაიმერი TaqMan საცდელი ნარევი | 18 μl × N |
| RT-PCR რეაქციის ხსნარი | 2 μl × N |
| *N = ტესტირებული ნიმუშების რაოდენობა + 1 (უარყოფითი კონტროლი) + 1 (nCOVდადებითი კონტროლი) | |
2.2 კომპონენტების საფუძვლიანად შერევის შემდეგ, გააკეთეთ ცენტრიფუგა მცირე ხნით, რათა მილის კედელზე არსებული მთელი სითხე მილის ძირში ჩავარდეს და შემდეგ 20 μl გამაძლიერებელი სისტემა PCR მილში გადანაწილდეს.
3 სინჯის აღება (ნიმუშის მომზადების ადგილი)
ამოღების შემდეგ დაამატეთ 5 მკლ უარყოფითი და დადებითი კონტროლი.შესამოწმებელი ნიმუშის რნმ ემატება PCR რეაქციის მილს.
მილს მჭიდროდ დაახურეთ თავსახური და ცენტრიფუგა 8000 ბრ/წთ-ზე რამდენიმე წამის განმავლობაში, სანამ გადაიტანთ ამპლიფიკაციის აღმოჩენის ზონაში.
4 PCR გაძლიერება (გაძლიერებული გამოვლენის არეალი)
4.1 მოათავსეთ რეაქციის მილი ინსტრუმენტის ნიმუშის უჯრედში და დააყენეთ პარამეტრები შემდეგნაირად:
| ეტაპი | ციკლი ნომერი | ტემპერატურა(°C) | დრო | კოლექციასაიტი |
| უკუტრანსკრიფცია | 1 | 42 | 10 წთ | - |
| წინასწარ დენატურაციაn | 1 | 95 | 1 წუთი | - |
| ციკლი | 45 | 95 | 15 წ | - |
| 60 | 30-იანი წლები | მონაცემთა შეგროვება |
ინსტრუმენტის გამოვლენის არხის შერჩევა: აირჩიეთ FAM, HEX, CY5 არხი ფლუორესცენციის სიგნალისთვის.მითითებისთვის ფლუორესცენტური NONE, გთხოვთ, არ აირჩიოთ ROX.
5 შედეგის ანალიზი (გთხოვთ, გაეცნოთ თითოეული ინსტრუმენტის ექსპერიმენტულ ინსტრუქციას დაყენებისთვის)
რეაქციის შემდეგ შეინახეთ შედეგები.ანალიზის შემდეგ, დაარეგულირეთ საწყისი მნიშვნელობა, დასასრული მნიშვნელობა და საბაზისო ზღვრული მნიშვნელობა სურათის მიხედვით (მომხმარებელს შეუძლია შეცვალოს ფაქტობრივი სიტუაციის მიხედვით, საწყისი მნიშვნელობა შეიძლება დაყენდეს 3~15-ზე, დასასრულის მნიშვნელობა შეიძლება დაყენდეს 5~20, კორექტირება) ლოგარითმულ გრაფიკში ფანჯრის ზღურბლზე ზღურბლის ხაზი ლოგარითმულ ფაზაშია, ხოლო უარყოფითი კონტროლის გაძლიერების მრუდი არის სწორი ხაზი ან ზღურბლის ხაზის ქვემოთ).
6 ხარისხის კონტროლი (პროცედურული კონტროლი შედის ტესტში) უარყოფითი კონტროლი: აშკარა გამაძლიერებელი მრუდი არ არის FAM, HEX, CY5 გამოვლენის არხებისთვის
COV დადებითი კონტროლი: FAM და HEX გამოვლენის არხების აშკარა გამაძლიერებელი მრუდი, Ct მნიშვნელობა≤32, მაგრამ არ არის CY5 არხის გამაძლიერებელი მრუდი;
ზემოაღნიშნული მოთხოვნები უნდა დაკმაყოფილდეს ერთდროულად იმავე ექსპერიმენტში;წინააღმდეგ შემთხვევაში, ექსპერიმენტი არასწორია და უნდა განმეორდეს.
7 შედეგების განსაზღვრა.
7.1 თუ ტესტის ნიმუშის FAM და HEX არხებში არ არის გამაძლიერებელი მრუდი ან Ct მნიშვნელობა > 40, ხოლო CY5 არხში არის გამაძლიერებელი მრუდი, შეიძლება ვიმსჯელოთ, რომ არ არის 2019 წლის ახალი კორონავირუსი (2019-nCoV) რნმ ნიმუშში;
.2 თუ ტესტის ნიმუშს აქვს აშკარა გამაძლიერებელი მრუდები FAM და HEX არხებში და Ct მნიშვნელობა არის ≤40, შეიძლება ვიმსჯელოთ, რომ ნიმუში დადებითია 2019 წლის ახალ კორონავირუსზე (2019-nCoV).
7.3 თუ სატესტო ნიმუშს აქვს მკაფიო გამაძლიერებელი მრუდი FAM-ის ან HEX-ის მხოლოდ ერთ არხზე და Ct მნიშვნელობა არის ≤40, ხოლო მეორე არხზე არ არის გამაძლიერებელი მრუდი, საჭიროა შედეგების ხელახალი ტესტირება.თუ ხელახალი ტესტის შედეგები თანმიმდევრულია, ნიმუში შეიძლება დადებითად შეფასდეს ახალისთვის
კორონავირუსი 2019 (2019-nCoV).თუ ხელახალი ტესტის შედეგი უარყოფითია, შეიძლება ვიმსჯელოთ, რომ ნიმუში უარყოფითია 2019 წლის ახალ კორონავირუსზე (2019-nCoV).
დადებითი განსჯის ღირებულება
ROC მრუდის მეთოდი გამოიყენება ნაკრების საცნობარო CT მნიშვნელობის დასადგენად და შიდა კონტროლის საცნობარო მნიშვნელობა არის 40.
ტესტის შედეგების ინტერპრეტაცია
1. თითოეული ექსპერიმენტი უნდა შემოწმდეს უარყოფითი და დადებითი კონტროლისთვის.ტესტის შედეგების დადგენა შესაძლებელია მხოლოდ მაშინ, როდესაც კონტროლი აკმაყოფილებს ხარისხის კონტროლის მოთხოვნებს
2. როდესაც FAM და HEX გამოვლენის არხები დადებითია, შედეგი CY5 არხიდან (შიდა კონტროლის არხი) შეიძლება იყოს უარყოფითი სისტემის კონკურენციის გამო.
3. როდესაც შიდა კონტროლის შედეგი უარყოფითია, თუ ტესტი მილის FAM და HEX გამოვლენის არხებიც უარყოფითია, ეს ნიშნავს, რომ სისტემა გამორთულია ან ოპერაცია არასწორია, ტესტი არასწორია.ამიტომ, ნიმუშები ხელახლა უნდა შემოწმდეს.
