პროდუქტები
Lifecosm-ის SARS-Cov-2-RT-PCR დეტექციის ნაკრები 2019-nCoV-ისთვის
მოსალოდნელი გამოყენება
ეს ნაკრები გამოიყენება ახალი კორონავირუსის (2019-nCoV) თვისებრივი გამოვლენისთვის ყელის, ცხვირ-ხახის ნაცხის, ბრონქოალვეოლური ლავაჟის სითხის და ნახველის გამოყენებით. ამ პროდუქტის გამოვლენის შედეგი მხოლოდ კლინიკური მითითებისთვისაა და არ უნდა იქნას გამოყენებული კლინიკური დიაგნოზისა და მკურნალობის ერთადერთ მტკიცებულებად. რეკომენდებულია მდგომარეობის ყოვლისმომცველი ანალიზი პაციენტის კლინიკურ გამოვლინებებთან და სხვა ლაბორატორიულ ტესტებთან ერთად.
ინსპექტირების პრინციპი
ნაკრები დაფუძნებულია ერთსაფეხურიან RT-PCR ტექნოლოგიაზე. სინამდვილეში, 2019 წლის ახალი კორონავირუსის (2019-nCoV) ORF1ab და N გენები შეირჩა ამპლიფიკაციის სამიზნე რეგიონებად. სპეციფიკური პრაიმერები და ფლუორესცენტური ზონდები (N გენის ზონდები მონიშნულია FAM-ით, ხოლო ORF1ab ზონდები მონიშნულია HEX-ით) შექმნილია ნიმუშებში 2019 წლის ახალი ტიპის კორონავირუსის რნმ-ის აღმოსაჩენად. ნაკრები ასევე მოიცავს ენდოგენურ შიდა კონტროლის დეტექციის სისტემას (შიდა კონტროლის გენის ზონდი მონიშნულია CY5-ით) ნიმუშების შეგროვების, რნმ-ის და PCR ამპლიფიკაციის პროცესის მონიტორინგისთვის, რითაც მცირდება ცრუ უარყოფითი შედეგები.
ძირითადი კომპონენტები
| კომპონენტები | მოცულობა（48T/კომპლექტი) |
| RT-PCR რეაქციის ხსნარი | 96µl |
| nCOV პრაიმერი TaqMan ზონდი (ORF1ab, N გენი, RnaseP გენი) | 864µl |
| ნეგატიური კონტროლი | 1500µl |
| nCOV დადებითი კონტროლი (l ORF1ab N გენი) | 1500µl |
საკუთარი რეაგენტები: რნმ-ის ექსტრაქციის ან გაწმენდის რეაგენტები. უარყოფითი/დადებითი კონტროლი: დადებითი კონტროლი არის სამიზნე ფრაგმენტის შემცველი რნმ, ხოლო უარყოფითი კონტროლი არის ნუკლეინის მჟავასგან თავისუფალი წყალი. გამოყენების დროს ისინი უნდა მონაწილეობდნენ ექსტრაქციაში და უნდა ჩაითვალოს ინფექციურად. მათი დამუშავება და განადგურება უნდა მოხდეს შესაბამისი რეგულაციების შესაბამისად.
შინაგანი საცნობარო გენი არის ადამიანის RnaseP გენი.
შენახვის პირობები და ვარგისიანობის ვადა
-20±5℃, მოერიდეთ 5-ზე მეტჯერ გაყინვას და გალღობას, ვარგისია 6 თვის განმავლობაში.
შესაბამისი ინსტრუმენტი
FAM / HEX / CY5 და სხვა მრავალარხიანი ფლუორესცენტური PCR ინსტრუმენტით.
ნიმუშის მოთხოვნები
1. გამოსაყენებელი ნიმუშების ტიპები: ყელის ნაცხი, ცხვირ-ხახის ნაცხი, ბრონქოალვეოლური ლავაჟის სითხე, ნახველი.
2. ნიმუშების შეგროვება (ასეპტიკური ტექნიკა)
ფარინგეალური ტამპონი: ერთდროულად ორი ტამპონით გაწმინდეთ ნუშურა ჯირკვლები და ფარინგეალური კედელი, შემდეგ კი ტამპონის თავი ჩადეთ ნიმუშის ხსნარის შემცველ სინჯარაში.
ნახველი: პაციენტის ღრმა ხველის შემდეგ, დახველებული ნახველი შეაგროვეთ ხრახნიან თავსახურიან საცდელ მილში, რომელიც შეიცავს ნიმუშის ხსნარს; ბრონქოალვეოლური ლავაჟის სითხე: ნიმუშის აღება სამედიცინო პროფესიონალების მიერ. 3. ნიმუშების შენახვა და ტრანსპორტირება
ვირუსის იზოლაციისა და რნმ-ის ტესტირებისთვის აღებული ნიმუშები რაც შეიძლება მალე უნდა შემოწმდეს. ნიმუშები, რომელთა აღმოჩენა 24 საათის განმავლობაში შეიძლება, შეიძლება შეინახოს 4℃ ტემპერატურაზე; ის ნიმუშები, რომელთა აღმოჩენა 24 საათის განმავლობაში ვერ მოხერხდება.
საათები უნდა ინახებოდეს -70℃ ან უფრო დაბალ ტემპერატურაზე (თუ -70℃ შენახვის პირობები არ არის, ისინი უნდა იყოს
დროებით შეინახეთ -20°C მაცივარში). ტრანსპორტირების დროს ნიმუშების განმეორებითი გაყინვა და გალღობა თავიდან უნდა იქნას აცილებული. ნიმუშები აღების შემდეგ რაც შეიძლება მალე უნდა გაიგზავნოს ლაბორატორიაში. თუ ნიმუშების დიდ მანძილზე ტრანსპორტირებაა საჭირო, რეკომენდებულია მშრალი ყინულით შენახვა.
ტესტირების მეთოდები
1 ნიმუშის დამუშავება და რნმ-ის ექსტრაქცია (ნიმუშის დამუშავების არეალი)
რნმ-ის ექსტრაქციისთვის რეკომენდებულია 200 მკლ თხევადი ნიმუშის აღება. ექსტრაქციის შესაბამისი ნაბიჯებისთვის იხილეთ კომერციული რნმ-ის ექსტრაქციის ნაკრებების ინსტრუქციები. როგორც უარყოფითი, ასევე უარყოფითი
ამ ნაკრებში არსებული საკონტროლო ჯგუფები მონაწილეობდა ექსტრაქციაში.
2 PCR რეაგენტის მომზადება (რეაგენტის მომზადების ზონა)
2.1 ამოიღეთ ყველა კომპონენტი კომპლექტიდან, გაალღვეთ და აურიეთ ოთახის ტემპერატურაზე. გამოყენებამდე რამდენიმე წამის განმავლობაში ცენტრიფუგირეთ 8000 ბრ/წთ-ზე; გამოთვალეთ რეაგენტების საჭირო რაოდენობა და რეაქციის სისტემა მომზადდება შემდეგ ცხრილში მითითებული წესით:
| კომპონენტები | N პორცია (25µl სისტემა) |
| nCOV პრაიმერი TaqMan საცდელი ნარევი | 18 µლ × N |
| RT-PCR რეაქციის ხსნარი | 2 µლ × N |
| *N = ტესტირებული ნიმუშების რაოდენობა + 1 (უარყოფითი კონტროლი) + 1 (nCOVდადებითი კონტროლი) | |
2.2 კომპონენტების საფუძვლიანი შერევის შემდეგ, მოკლე დროით ჩაატარეთ ცენტრიფუგირება, რათა მილის კედელზე არსებული მთელი სითხე მილის ფსკერზე ჩამოვიდეს, შემდეგ კი 20 µლ ამპლიფიკაციის სისტემა გადაიტანეთ PCR მილში.
3. სინჯის აღება (ნიმუშის მომზადების არეალი)
ექსტრაქციის შემდეგ დაამატეთ 5μl უარყოფითი და დადებითი კონტროლი. ტესტირებული ნიმუშის რნმ ემატება PCR რეაქციის მილს.
მჭიდროდ დაახურეთ ტუბს თავსახური და რამდენიმე წამის განმავლობაში დააცენტრიფუგეთ 8000 ბრ/წთ-ზე, სანამ ამპლიფიკაციის აღმოჩენის ზონაში გადაიტანთ.
4 PCR ამპლიფიკაცია (გაძლიერებული აღმოჩენის არეალი)
4.1 მოათავსეთ რეაქციის მილი ინსტრუმენტის ნიმუშის უჯრაში და დააყენეთ პარამეტრები შემდეგნაირად:
| ეტაპი | ველოსიპედით ნომერი | ტემპერატურა(°C) | დრო | კოლექციასაიტი |
| უკანატრანსკრიფცია | 1 | 42 | 10 წთ | - |
| წინასწარი დენატურაციაn | 1 | 95 | 1 წთ | - |
| ველოსიპედით | 45 | 95 | 15 წმ | - |
| 60 | 30-იანი წლები | მონაცემთა შეგროვება |
ინსტრუმენტის აღმოჩენის არხის შერჩევა: ფლუორესცენტული სიგნალისთვის აირჩიეთ FAM, HEX, CY5 არხი. საცნობარო ფლუორესცენტული NONE-სთვის, გთხოვთ, არ აირჩიოთ ROX.
5 შედეგების ანალიზი (დაყენებისთვის იხილეთ თითოეული ინსტრუმენტის ექსპერიმენტული ინსტრუქციები)
რეაქციის შემდეგ შეინახეთ შედეგები. ანალიზის შემდეგ, ლოგარითმულ გრაფიკში გამოსახულების მიხედვით შეცვალეთ საწყისი, საბოლოო და ზღურბლის მნიშვნელობა (მომხმარებელს შეუძლია შეცვალოს რეალური სიტუაციის მიხედვით, საწყისი მნიშვნელობა შეიძლება დაყენდეს 3~15-ზე, საბოლოო მნიშვნელობა შეიძლება დაყენდეს 5~20-ზე, კორექტირება). ფანჯრის ზღურბლთან ზღურბლის ხაზი ლოგარითმულ ფაზაშია, ხოლო უარყოფითი კონტროლის ამპლიფიკაციის მრუდი სწორი ხაზია ან ზღურბლის ხაზის ქვემოთაა.
6 ხარისხის კონტროლი (ტესტში შედის პროცედურული კონტროლი) უარყოფითი კონტროლი: FAM, HEX, CY5 დეტექციის არხებისთვის აშკარა ამპლიფიკაციის მრუდი არ არის
COV დადებითი კონტროლი: FAM და HEX დეტექციის არხების აშკარა ამპლიფიკაციის მრუდი, Ct მნიშვნელობა ≤32, მაგრამ CY5 არხის ამპლიფიკაციის მრუდი არ არის;
ზემოთ ჩამოთვლილი მოთხოვნები უნდა დაკმაყოფილდეს ერთდროულად ერთსა და იმავე ექსპერიმენტში; წინააღმდეგ შემთხვევაში, ექსპერიმენტი არასწორია და საჭიროებს გამეორებას.
7 შედეგების განსაზღვრა.
7.1 თუ სატესტო ნიმუშის FAM და HEX არხებში არ არის ამპლიფიკაციის მრუდი ან Ct მნიშვნელობა > 40, ხოლო CY5 არხში არის ამპლიფიკაციის მრუდი, შეიძლება ვივარაუდოთ, რომ ნიმუშში არ არის 2019 წლის ახალი კორონავირუსის (2019-nCoV) რნმ;
.2 თუ სატესტო ნიმუშს აქვს აშკარა ამპლიფიკაციის მრუდები FAM და HEX არხებში და Ct მნიშვნელობა ≤40-ია, შეიძლება ვივარაუდოთ, რომ ნიმუში დადებითია 2019 წლის ახალ კორონავირუსზე (2019-nCoV).
7.3 თუ სატესტო ნიმუშს FAM-ის ან HEX-ის მხოლოდ ერთ არხში აქვს მკაფიო ამპლიფიკაციის მრუდი და Ct მნიშვნელობა ≤40-ია, ხოლო მეორე არხში არ არის ამპლიფიკაციის მრუდი, შედეგები ხელახლა უნდა შემოწმდეს. თუ ხელახალი ტესტირების შედეგები თანმიმდევრულია, ნიმუში შეიძლება შეფასდეს, როგორც დადებითი ახალი ტესტისთვის.
კორონავირუსი 2019 (2019-nCoV). თუ ხელახალი ტესტის შედეგი უარყოფითია, შეიძლება ითქვას, რომ ნიმუში უარყოფითია 2019 წლის ახალ კორონავირუსზე (2019-nCoV).
დადებითი შეფასების ღირებულება
კომპლექტის CT საცნობარო მნიშვნელობის დასადგენად გამოიყენება ROC მრუდის მეთოდი, ხოლო შიდა კონტროლის საცნობარო მნიშვნელობაა 40.
ტესტის შედეგების ინტერპრეტაცია
1. თითოეული ექსპერიმენტი უნდა შემოწმდეს უარყოფითი და დადებითი კონტროლისთვის. ტესტის შედეგების დადგენა შესაძლებელია მხოლოდ მაშინ, როდესაც კონტროლი აკმაყოფილებს ხარისხის კონტროლის მოთხოვნებს.
2. როდესაც FAM და HEX აღმოჩენის არხები დადებითია, CY5 არხიდან (შიდა კონტროლის არხი) მიღებული შედეგი შეიძლება უარყოფითი იყოს სისტემური კონკურენციის გამო.
3. როდესაც შიდა კონტროლის შედეგი უარყოფითია, თუ საცდელი მილის FAM და HEX დეტექციის არხებიც უარყოფითია, ეს ნიშნავს, რომ სისტემა გამორთულია ან ოპერაცია არასწორია, ანუ ტესტი არასწორია. ამიტომ, ნიმუშები ხელახლა უნდა შემოწმდეს.
